محققان تشخیص داده اند که سمیّت کبدی ناشی از تتراکلریدکربن همراه با مقدار زیادی از تجمع کلسیم در کبد می باشد. اما ارتباط بین نکروز کبدی و تجمع کلسیم هنوز مبهم می باشد، غلظت کلسیم خارج سلولی ۱۰^۴ تا ۱۰^۳ برابر بیشتر از غلظت کلسیم سیتوپلاسمی است. این گرادیان غلظت در نتیجه نفوذپذیری نسبی غشاء پلاسمایی به یون کلسیم و انتقال فعال کلسیم توسط پمپ های کلسیم که در غشاء وجود دارند ایجاد می شود. بسیاری از سموم سطح کلسیم داخل سلولی را بالا می برند که یا با افزایش ورود کلسیم از خارج به داخل است یا در نتیجه مهار انتقال آن به خارج سلول می باشد (۹۰).
Farber و همکارانش تصور کردند که تغییر در متابولیسم کلسیم به عنوان یک متابولیسم کلی برای سمیت تتراکلریدکربن است، به طوری که آسیب سمی اولیه مهار یک یا چند پمپ مختلف از کلسیم است که سبب افزایش کلسیم داخل سلولی می شود. غلظت کمی از تتراکلریدکربن (۱mM) سبب افزایش سریع در غلظت سیتوپلاسمی کلسیم آزاد می شود این افزایش منجر به فعال سازی یک سری از آنزیم های هیدرولیتیک و تخریب غشاء سلول ها و در نهایت مرگ سلول ها می شود. پمپ کلسیم شبکه آندوپلاسمیک ممکن است یک نقش مهمی را در این فرایند داشته باشد، زیرا ارگانلی است که CYP450 که مهمترین مسیر متابولیسمی برای فعال شدن تتراکلریدکربن است و همچنین پمپ کلسیم که یک سیستم اصلی برای نگه داشتن هومئوستاز کلسیم سیتوپلاسمی است را دارد (۴۶).

فصل دوم:
مواد و روش ها
۲-۱- دستگاه‌ها و لوازم و تجهیزات مورد استفاده
دستگاه‌ها،‌ لوازم و تجهیزاتی که در این تحقیق مورد استفاده قرار گرفت به صورت زیر است:
دستگاه سانتریفوژ ساخت کشور آلمان
بن ماری
قفس نگهداری موش از جنس پلی کربنات با سقف مشبک از جنس استیل
ترازوی حساس الکتریکی با دقت ۰۰۱/۰ گرم
سرنگ‌های انسولینی ساخت کشور ایران
پی پت ، همزن شیشه ای، ‌ارلن مایر، استوانه مدرج و بشر جهت تهیه محلول دارو
ظرف مخصوص بیهوش کردن حیوانات
کاغذ صافی ساخت کشور آلمان
وسایل جراحی جهت خونگیری
یک جفت دستکش مخصوص گرفتن موش
جا لوله ای «راک» ساخت ایران
لوله آزمایش
دوربین عکاسی
ظرف آبخوری مخصوص موش
اون (گرمخانه) ساخت ایران دنا
ظرف شیشه ای درب دار
پتری
سرنگ cc 2
کامپیوتر جهت آنالیز داده ها
یخچال فریزر جهت نگهداری سرم ساخت ایران آزمایش
۲-۲- ترکیبات شیمیایی و مواد مصرفی
گیاه کرفس تهیه شده از استان فارس
تتراکلریدکربن
روغن زیتون ساخت شرکت فامیلا
الکل سفید ساخت شرکت تولیدی فرآورده‌های تقطیر پارسیان
الکل صنعتی ساخت شرکت پارسیان شیراز
آب مقطر
تیغ جراحی «ساخت ایران»
برچسب کاغذی «ساخت ایران»
پنبه «ساخت ایران»
خاک اره
خوراک مخصوص موش تولیدی خوراک دام پارس
دستکش در انواع مختلف (کتانی ،‌یکبار مصرف ، جراحی)
موش صحرایی نر
۲-۳- دستگاه پرکولاتور^[۷۴]
دستگاه عصاره گیری است که با بهره گرفتن از فشار کار می کند. این دستگاه حاوی یک مخزن شیشه ای دهان گشاد می باشد که در پایین حاوی شیر کنترل است. مواد مورد نظر در داخل مخزن قرار می گیرد و به علت فشاری که به آن وارد می شود حلال، قطره قطره از آن خارج می شود.
شکل (۲ – ۱) دستگاه پرکولاتور
۲-۴- روش تهیه عصاره هیدروالکلی گیاه کرفس:
ابتدا مقدار ۱۵کیلوگرم گیاه کرفس از توابع استان فارس در ابتدای مرداد ماه ۱۳۹۲ تهیه گردیدو پس از تمیز نمودن، آن ها را در یک اتاق تاریکی پهن کرده تا خشک شود. و سپس به آزمایشگاه منتقل شد، ابتدا کرفس خشک شده را به وسیله آسیاب پودر کرده و ۱۰۰ گرم از پودر کرفس آسیاب شده را برداشته و در ۷۰۰ سی سی اتانول۷۰ در صد مخلوط کرده و به وسیله دستگاه پرکولاسیون به مدت ۳روز
(۷۲ ساعت) در هوای آزمایشگاه نگه داری کرده و بعد از آن عصاره را از دستگاه می گیریم. در ضمن برای اینکه گیاه خشک نشود و عصاره بیشتری به دست بیاید همان اندازه که قطره قطره از شیر دستگاه عصاره خارج می شود به همان اندازه حلال مورد نظر که همان هیدرو الکل می باشد، از بالای دستگاه اضافه کرده تا مادامی که عصاره از پایین دستگاه گرفته می شود دیگر رنگی نداشته باشد. عصاره به دست آمده را به وسیله دستگاه روتاری و یا بن ماری غلیظ کرده تا تمام هیدرو الکل عصاره گرفته شود سپس برای اینکه عصاره رطوبتی نداشته باشد در دستگاه دیگری به نام دیسیکاتور که خلاء قوی ایجاد می کند به مدت ۲۴ ساعت نگه داری کرده و راندمان ۱۰۰ گرم گیاه پودر شده که برداشتیم ۲۰ گرم عصاره غلیظ کرفس می باشد.
شکل(۲-۲): نحوه عصاره گیری
۲-۵-حیوانات مورد استفاده و نحوه ‌نگهداری آنها
حیوانات مورد آزمایش در این تحقیق موشهای سفید بزرگ نر بالغ از نژاد اسپراگوداولی با وزن تقریبی۵ ±۲۰۰ گرم و سن ۳-۲ ماه بودند که از خانه حیوانات شیراز تهیّه و در همان مرکز آزمایشات انجام شدند. درجه حرارت محیط ۲ ± ۲۵ در طول شبانه روز ثابت و طی دوره ی نوری ۱۲ ساعت تاریکی و ۱۲ ساعت روشنایی قرار داشتند.
آب و غذا در تمام طول آزمایش بدون هیچ محدودیتی در اختیار آنها قرار می‌گرفت. قفس‌های نگهداری حیوانات از جنس پلی کربنات در ابعاد ۴۰ × ۲۵ × ۱۵ با سقف مشبک از جنس استیل بود که در هرکدام از قفس‌ها پنج سر موش نگهداری می‌شدند.کف قفسها توسط تراشه‌های چوب مفروش می‌شد. خاک اره‌های موجود در کف قفس هر روز یکبار تعویض می‌شدند.
شکل(۲-۳): تصویر قفس های نگهداری موش
۲-۶- گروه بندی حیوانات
قبل از انجام تحقیقات حیوانات را وزن کرده تا در یک محدوده وزنی خاصی باشند. وزن موش‌های نر مورد استفاده در این تحقیق، ‌به طور میانگین حدود ۵ ±۲۰۰ گرم بودند. تعداد کل موش‌ها ۴۰ سر بودند که به صورت زیر به گروه های کنترل، شاهد و تجربی تقسیم شدند.
جدول ۲-۱- گروه بندی نمونه ها بر اساس مصرف عصاره هیدروالکلی گیاه کرفس و تتراکلرید کربن